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仪器的主要功能、技术指标、学术特色和应用范围:
主要功能:
利用激光扫描、共聚焦成像系统,获得比普通荧光显微镜更高对比度、高解析度图象,可同时获得最多8通道荧光图像,多重荧光的断层扫描、重叠及三维重建,荧光光谱分析,荧光各项指标定量分析,荧光样品的时间延迟扫描,精确共定位分析,可完成ROI,荧光漂白后恢复FRAP, FLIP,荧光共振能量转移FRET等实验。
技术指标:
1 激光器部分:Ar 激光:458nm、477nm、488nm、514nm,30mW
HeNe 激光:543nm,1mW
HeNe 激光:633nm,5mW
两极真空管激光:405nm, 30mw
快速AOTF,8通道,切换时间<5微秒
2 扫描器部分:
2.1 扫描器与显微镜一体化设计,一体化像差及色差校正。
2.2 扫描装置两个独立电流测定扫描镜,DSP控制,提供超短波激光谱线和帧回扫时间。
2.3 扫描分辨率4x1 至 2048x2048 象素, 还可供多通道连续调节
2.4 扫描速度13 x 2 速镜台; 最高5 帧/秒,512x512 象素 (最大 77 帧/秒,512x32 象素);每行512象素时,最少o.38ms
2.5 扫描放大倍数0.7x 至40x, 数字式, 每次可调 0.1
2.6 扫描旋转360度自由旋转,每次可调1度,自由xy补偿
2.7 扫描区域居中的图像平面和同种照明条件下最大18mm对角线区域
2.8 三个荧光检测器,其中一个为多PMT组成的光谱检测器(META,可自由选择荧光检测波长范围,可同时采集8个通道图像,光谱扫描功能单次扫描即可采集荧光光谱曲线)。
2.9 每个荧光检测器前均有独立可调位置和大小的针孔。
2.10 一个可用于明场和DIC的透射光检测通道。
3 显微镜部分
3.1 研究型全自动倒置显微镜Axio Observer Z1。
3.2 荧光附件:103W 汞灯,六位电动滤色镜转盘,电动光闸,含UV、B、G激发滤色镜组件
3.3 物镜:针对共聚焦显微镜应用优化的高分辨率、高透过率荧光物镜
10X,数值孔径0.30,工作距离5.5 mm
20X, 数值孔径0.50,工作距离2.0 mm
40X,数值孔径0.75,工作距离0.71 mm
63X,数值孔径1.40,工作距离0.18 mm,油浸式
100X,数值孔径1.40,油浸式
3.4 通过触控屏控制显微镜并显示工作状态。
3.5 Z轴调焦驱动马达,最小步进:10 nm,调焦行程:10 mm
4 软件部分:
4.1 激光扫描及显微镜一体化控制,图像采集,ROI实验设计,图像分析计算,图像输出等各种功能模块。
4.2 图像浏览软件,可用于共聚焦系统以外的任意计算机,以便于浏览、输出共聚焦图像。
4.3 计算机:Pentium 4 HT 3.0GHz处理器,120G S-ATA高速硬盘,1G内存,DVD刻录机,双液晶显示器,Windows XP操作系统。
学术特色:
1、各通道配备独立可调的针孔,保证了各通道光切厚度的一致性,实现各标记物准确的定位关系,可实现精准共定位和三维重建。
2、META检测器接收全光谱信息,并行采集信号,减少样品扫描次数,有效地避免荧光淬灭和对活细胞的损伤。
3、建立在META扫描基础上利用发射指纹图谱技术对荧光光谱进行分析,拆分光谱重叠的不同标记的信号,可以解决同时使用多种荧光标记时,如GFP/FITC双标记,激发光或发射光波长重叠造成的串色问题。
应用范围:涉及生物化学、细胞生物学、微生物、遗传发育、食品、药理、生理、医学、病理、植物、神经科学、海洋生物学等的研究工作。
用于观察各种自发荧光样品或可被荧光标记的样品。组织和细胞等的形态学分析(包括细胞或组织内部微细结构的形态特征);组织与细胞的三维结构构建;通过荧光原位杂交(FISH),原位实时PCR产物分析,荧光共振能量转移分析(FRET),荧光漂白恢复研究(FRAP),共定位分析等实验研究细胞内物质定位、运输和能量转换,细胞中离子和PH值变化(RATIO),神经递质,细胞骨架,蛋白质相互作用等。
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